ВВЕДЕНИЕ

Йодантипирин (1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразо-лон) — новый противовирусный препарат для лече­ния и профилактики клещевого энцефалита [4]. Разре­шен к медицинскому применению (регистрационные удостоверения 96/316/2 и 96/316/5). Белый кристал­лический порошок, практически нерастворим в воде, выпускается в форме таблеток по 100 мг; назначают внутрь по 0,1 - 0,3 мг 2 - 3 раза в день.

Целью работы явились токсикологическое изуче­ние препарата, оценка его мутагенной активности, эмбристоксических, тератогенных и аллергенных свойств.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Токсичность определяли на беспородных живот­ных обоего пола: острую на белых мышах массой 20 -22 г и крысах массой 200 - 240 г с использованием ме­тода Литчфилда и Вилкоксона, хроническую — на крысах (субстанция в 1% крахмальном геле) и собаках (лекарственная форма в виде таблеток), содержащихся в стандартных условиях вивария. Каждая эксперимен­тальная группа состояла из 12 крыс с исходной массой 160-220 г* 4 собак массой 6 -11 кг. Препарат вводили ежедневно в течение 3-х месяцев внутрь: крысам в эффективной (50 мг/кг), средней (100 мг/кг) и субтоксической (250 мг/кг) дозах? собакам — 100 мг на животное. Крысы контрольной группы получали эквиобъемное количество растворителя. О степени токсич­ности йодантипирина судили по общему состоянию животных, динамике массы тела, показателям пери­ферической крови (гемоглобин, эритроциты, ретикулоциты, лейкоциты, СОЭ, лейкоцитарная формула), функциональному состоянию ЦНС (суммационно-пороговый показатель и исследовательское поведение в тесте "открытое поле"), сердца (ЭКГ во II стандартном отведении), печени (проба с нагрузкой бромсульфалеином, содержание в сыворотке крови аланин- и аспартатаминотрансфераз (АЛТ и ACT), щелочной фосфатазы), почек (суточный диурез, рН мочи, содержание в моче сахара, белка, креатинина) [5]. Ис­следуемые показатели регистрировали до введения препарата (фон), через 1 и 3 мес эксперимента. Затем через 24 ч после последнего введения препарата, жи­вотных забивали в 2 срока: сразу после окончания вве­дения препарата и через 2 нед после его отмены; орга­ны и ткани подвергали патологоанатомическому исследованию.

Эмбриотоксичность и тератогенность йодантипи­рина исследовали на 100 беременных беспородных крысах. Йодантипирин вводили в желудок в дозе 250 мг/кг с 1 по 19 день беременности и по 50 и 100 мг/кг с 6-го по 16-й день. Критериями оценки по­вреждающего действия служили пред- и постимплантационная смертность, масса и длина плодов, масса плаценты, аномалии развития внутренних органов, со­стояние костной системы. Влияние препарата в дозе 250 мг/кг на репродуктивную функцию оценивали на 30 самцах (введение в течение 60 дней до скрещивания с интактными самками) и 60 самках (введение в тече­ние 14 дней до скрещивания с интактными самцами) [2,5]. Для оценки мутагенной активности препарата учитывали генные мутации на индикаторных бактери­ях (штаммы Salmonella typhimurium ТА 100, ТА 98, ТА 1537, ТА 1950 и ТА 1534) в тесте Эймса — Salmo­nella /микросомы, хромосомные аберрации в клетках костного мозга мышей, доминантные летальные мута­ции у мышей [3, 5]. Аллергизирующие свойства опре­деляли на беспородных белых мышах-самцах массой 20-22 г и морских свинках массой 250-300 г [1]. Сенсибилизацию организма выявляли in vitro по дегрануляции тучных клеток, получаемых из перитонеального эксудата белых мышей, которым внутрижелудочно вводили йодантипирин в дозах 50 и 500 мг/кг в течение 10 дней. Для оценки реакций гиперчувстви­тельности замедленного типа (ГЗТ) определяли влия­ние йодантипирина на Т-предшественники и Т-эффекторы ГЗТ. В первом случае сенсибилизацию организма проводили одновременно с последним введением пре­парата путем подкожной инъекции взвеси эритроцитов барана в количестве 0,1 мл. Разрешающую дозу анти­гена вводили в подушечки задних лап через 5 сут по­сле сенсибилизации организма. Для определения влияния йодантипирина на зрелые клетки-эффекторы ГЗТ вводили в дозе 500 мг/кг однократно одновремен­но с инъекцией разрешающей дозы антигена. Влияние препарата на развитие реакции гиперчувствительности немедленного типа (ГНТ) оценивали по воспроизведе­нию реакции общей анафилаксии на морских свинках после введения им йодантипирина в дозах 50 и 500 мг/кг в течение 10 дней; в качестве антигена ис­пользовали бычий сывороточный альбумин.

Весь фактический материал обработан методами вариационной статистики с применением параметри­ческих и непараметрических критериев.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

По величине среднесмертельных доз (ЛД50 при внутрижелудочном введении через зонд мышам со­ставляет 1600 мг/кг, крысам — 2060 мг/кг; при внутрибрюшинном введении крысам —1720 мг/кг) йодан­типирин относится к умеренно токсичным веществам. Выраженной видовой и половой чувствительности к нему не выявлено. Картина острого отравления препаратом у мышей и крыс однотипна: животные малопод­вижны, скучены в одном месте, неопрятны, обильно пьют воду, у части животных отмечена диарея.

При введении субстанции йодантипирина крысам в желудок в течение 3 мес во всех изученных дозах (50, 100 и 250 мг/кг) не выявлено гибели животных, суще­ственных изменений общего состояния (поведение, ап­петит, выделения, шерсть, слизистые), массы тела, по­казателей периферической крови по сравнению с контрольными животными. Препарат не вызывал зна­чительных сдвигов со стороны ЭКГ и ритма сердечных сокращений, функционального состояния ЦНС, опре­деляемого по тестам суммационно-порогового пока­зателя и "открытого поля".

Судя по коэффициенту ретенции бромсульфалеина, йодантипирин не оказывает неблагоприятного воз­действия на экскреторную функцию печени, однако в дозе 250 мг/кг к концу срока введения повышает ак­тивность АЛТ в сыворотке крови, не влияя на актив­ность ACT и щелочной фосфатазы. У крыс, получавших препарат, отсутствовали изменения со стороны функции почек: сохранялся нормальный суточный диурез, близкие к норме значения рН мочи, в ней от­сутствовал сахар, уровень белка и креатинина колебал­ся в пределах физиологической нормы для крыс.

В экспериментах на собаках йодантипирин в дозе 100 мг не вызывал отклонений в поведении животных и показателях периферической крови.

Патоморфологические изменения во внутренних органах выявлены только у части (2 из 5) крыс, полу­чивших йодантипирин в большей дозе (250 мг/кг). В печени этих животных определяются различной степе­ни выраженности дистрофические изменения гепатоцитов при сохранении балочной ориентации печеноч­ных клеток. Гепатоциты увеличены в размерах, цитоплазма вакуолизирована, в отдельных клетках в цитоплазме выявляются мелкие капли жировых ве­ществ. Умерено выражены явления инфильтрации перипортальной соединительной ткани макрофагами и лейкоцитами. Сосуды и желчные протоки обычного диаметра. Описанные изменения можно трактовать как мелкокапельное ожирение печени простого типа. Данный процесс является морфологически и функцио­нально обратимым. В других внутренних органах крыс, а также во всех органах собак не обнаружено па­тологических отклонений, обусловленных токсиче­ским действием препарата.

Йодантипирин в дозах 50-250 мг/кг при введе­нии в желудок крысам в различные сроки беременно­сти не проявил эмбриотоксических и тератогенных свойств: не влиял на продолжительность беременно­сти, пред- и постимплантационную гибель эмбрионов, количество желтых тел, мест имплантаций и живых плодов, их массу и краниокаудальный размер. У эм­брионов, подвергшихся в пренатальном периоде воз­действию йодантипирина, не отмечено уродств или по­роков развития внутренних органов, а также аномалий развития скелета. Во всех испытанных дозах препарат не влиял на число родившихся крысят, их массу, раз­меры, а также на смертность в течение первых 2 мес. постнатального развития. Йодантипирин не нарушает репродуктивную функцию самцов и самок: число жел­тых тел, мест имплантаций, живых плодов, индекс бе­ременности, число резорбций на одну самку оказались на уровне контрольных величин. Гистологический анализ репродуктивных органов самцов и самок не вы­явил каких-либо морфологических изменений.

Исследование возможной мутагенной активности йодантипирина в тестах на Salmonella методом, прямо­го контакта и с метаболической активацией in vitro и in vivo (с использованием мышей-самцов линии F₁ [СВА х C₅₇B1/6] в качестве промежуточного хозяина) свидетельствует об отсутствии мутагенного эффекта препарата и продуктов его метаболизма. Учет хромо­сомных аберраций клеток костного мозга мышей ли­нии СВ А через 6 и 24 ч после внутрижелудочного введения йодантипирина в дозе 500 мг / кг не выявил ста­тистически достоверных, по отношению к контролю, изменений числа клеток с цитогенетическими наруше­ниями. Оценка доминантных летальных мутаций в зародышевых клетках мышей линии СВА по уровню постимплатационных потерь также не обнаружила повреждающего действия препарата на генетические структуры половых клеток животных — йодантипи­рин в дозе 500 мг/кг не влиял на количество эмбрио­нов, а также остановившихся в развитии на стадиях поздних и ранних сперматид. Следовательно, изучае­мый препарат не обладает мутагенными свойствами.

Йодантипирин не обладает аллергизирующим эф­фектом. В дозах 50 и 500 мг/кг препарат не активиро­вал реакцию ГЗТ, не изменял показатель дегрануляции тучных клеток, способствовал снижению проявлений реакции ГНТ.

Таким образом, доклиническое токсикологическое исследование йодантипирина свидетельствует, что этот препарат обладает малой токсичностью как при однократном внутрижелудочном и внутрибрюшинном введении лабораторным животным разных видов, так и при длительном в течение 3 мес введении крысам и собакам в желудок. Препарат не вызывает отдаленных отрицательных эффектов (мутагенность, эмбриотоксичность, тератогенность, аллергизирующие свойства).

ВЫВОДЫ

1. Противовирусный препарат йодантипирин по показателям ЛД₅₀ при однократном введении мышам и крысам в желудок и внутрибрюшинно обладает малой токсичностью.

2. При введении йодантипирина в течение 3 мес внутрь в дозах 50,100 и 250 мг/кг крысам и 100 мг со­бакам не выявлено существенных функциональных и морфологических нарушений.

3. В дозах 50-250 мг/кг препарат не проявляет мутагенных, эмбриотоксических, тератогенных и аллергизирующих свойств.