МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Изучение защитного действия Йодантипирина при гриппе и ОРВИ проводилось в период эпид. сезона для указанных инфекций (январь - март 1997 г.) на репрезентативных группах, сформированных методом случайного выбора. Исследования проведены в детском комбинате N 81 поликлинического отделения ТЩ СО РАН, а также в семьях сотрудников комбината. Препарат давался детям только с разрешения родителей (родители 11 детей отказались от приема Йодантипирина). Схемы приема Йодантипирина и его дозы разработаны на кафедре фармакологии СТМУ под руководством зав. кафедрой профессора А.С. Саратикова, они зависели от возраста детей.

I схема             (дети 3-5 лет, 90 человек) - первый день 100 мг (1 таблетка),

                                  далее по 50 мг (0,5 таблетки) каждые 3 дня;

II схема            (дети 6-9 лет 73 человека) - первый день 150 мг (1,5 таблетки),

                      далее по 100 мг (1 таблетка) 2 раза в неделю;

III схема          (дети 10-14 лет, 8 человек) - первый день 200 мг (2 таблетки),

                      далее по  100 мг (1  таблетка) каждые 2 дня в течение

                  всего эпид. сезона.

Максимальная кратность приема препарата во всех возрастных группах – 17-18  раз.

Контрольная группа - дети рядом расположенного детского комбината № 4, не принимавшие Йодантипирин и другие противовирусные препараты (190 человек).

При анализе заболеваемости дети были разделены на две основные группы: дошкольники (156 человек) и школьники (15 человек). Сравнивали заболеваемость гриппом и ОРВИ в основных и контрольной группах, далее рассчитывали индекс эффективности (К) и показатель защищенности (Е) по следующим формулам:

К = В ;           Е = В-А  х 100 %,

                                                                                                А    

где        А – доля заболевших среди лиц, получавших Йодантипирин по той или иной схеме;

В - доля заболевших среди лиц, не получавших Йодантипирин.

Кроме того, оценивали тяжесть клинического течения инфекционного процесса у заболевших, частоту и тяжесть побочных реакций при приеме Йодантипирина, картину периферической крови. У детей, принимавших Йодантипирин, изучали также функциональное состояние печени по активности аланиновой - АлАТ и аспарагиновой - АсАТ аминотрансфераз методом Ройтмана-Френкеля-Пасхиной [8] (цитолитический синдром) и щелочной фосфатазы - ЩФ по Богданскому [4] (холестатический синдром).

Через 1,5-2 недели (подгруппа 1А - дети 3-5 лет и подгруппа 2А - дети 6-9 лет), а также через 3-4 недели (подгруппы 1Б и 2Б соответственно) после отмены препарата изучались изменения показателей иммунного статуса.

Характеристику иммунного статуса осуществляли с помощью комплекса методов, позволяющего оценить как клеточные, так и гуморальные звенья иммунной системы.

1.      Общепринятыми гематологическими методами определяли общее содержание лейкоцитов, а также относительное и абсолютное количество лимфоцитов в периферической крови.

2.      Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови изучали на клетках, выделенных на градиенте плотности фиколл-верографин методом непрямой иммунофлюоресценции [6] с использованием моноклональных антител к дифференцировочным антигенам лимфоцитов фирмы "ДиагноТех" (Москва, ОНЦ). В качестве вторых антител служили кроличьи антитела против иммуноглобулинов белой мыши, меченные FITC, производства НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Е.Ф. Гамалеи (Москва). Исследовали следующие субпопуляции иммунекомпетентных клеток: CD2+ (Т- и NK- клетки), CD3+ (зрелые Т-лимфоциты), CD4+ (Т-хелперы/индукторы), CD8+ (Т-киллеры/супрессоры), GDI6+ (натуральные киллеры), CD72+ (В-клетки).

3.      Оценка фагоцитарной функции нейтрофилов периферической крови проводилась в НСТ-тесте (в спонтанном и стимулированном вариантах); в качестве стимулятора служил опсонизированный зимозан [1]. Метод основан на «активации фагоцитов» при которой происходит  резкое усиление окислительной реакции. Индикатором реакции является нитротетразолиевый синий, который под влиянием окислительных    процессов внутри поглотившей его клетки, превращается в нерастворимый формазан, обнаруживаемый в виде темно-синих гранул.

4.      В сыворотке крови методом радиальной иммунодиффузии по Манчини [3,7] исследовали уровень основных классов иммуноглобулинов (IgM, IgG, IgA) и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) полиэтиленгликолевым методом [51] Иммуноглобулин  Е  определяли  с помощью твердофазного иммуноферментного метода, используя соответствующие тест-системы фирмы ЗАО "Вектор-БЕСТ" (г. Новосибирск).

5.      Количественное определение альфа-интерферона в сыворотке крови проводили твердофазным иммуноферментным методом с использованием наборов реагентов  ProConlFS  plus  производства  ТОО "Протеиновый  контур"   (г.   Санкт-Петербург).

РЕЗУЛЬТАТЫ и ОБСУЖДЕНИЕ
ВЛИЯНИЕ ЙОДАНТИПИРИНА НА ЗАБОЛЕВАЕМОСТЬ ДЕТЕЙ ГРИППОМ И ОРВИ И ТЯЖЕСТЬ КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИЙ

О защитном действии Йодантипирина судили по разнице заболеваемости гриппом и другими ОРВИ (этиологическая расшифровка данных инфекций не проводилась) в основных и контрольной группах.

Анализ заболеваемости позволил заключить, что Йодантипирин обладает определенными защитными свойствами. Заболеваемость ОРВИ и гриппом у детей дошкольного возраста распределялась следующим образом: из 156 человек, принимавших Йодантипирин, 35 (22,4%) заболели ОРВИ и 23 (14,7%) - гриппом; в контрольной группе (дети соответствующего возраста, не принимавшие Йодантипирин и другие противовирусные препараты) из 190 человек ОРВИ заболело 100 (52,6%), а гриппом - 64 (33,7%). Таким образом, среди детей дошкольного возраста, получавших Йодантипирин, заболело 37,2% (58 человек из 156), а в контрольной группе - 86/3% (164 человека из 190), т. е. прием Йодантипирина с профилактической целью способствовал снижению заболеваемости гриппом и ОРВИ в 2,3 раза (индекс эффективности равнялся 2,3; показатель защищенности ~ 56,9%).

Среди детей школьного возраста, принимавших Йодантипирин (15 человек), ОРВИ зарегистрированы у двух (13,3%), грипп – также у двух (13,3%) детей.

Сопоставление клинических проявлений ОРВИ и гриппа у части детей в основных и контрольной группах не выявило существенных различий. Заболевания протекали легко. Клинические проявления были в основном представлены ринитом и гиперемией слизистой ротоглотки. Кашель беспокоил всех больных. Однако в контрольной группе чаше наблюдалась лихорадка выше 38°С, длительность которой составила 2-3 дня.

ПОБОЧНОЕ ДЕЙСТВИЕ ЙОДАНТИПИРИНА

Побочных и аллергических реакций при приеме Йодантипирина у детей не наблюдалось.

ВЛИЯНИЕ ЙОДАНТИПИРИНА НА КАРТИНУ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ

В общем анализе крови у 10 детей 3-5 лет из 21 (47,6%) через 2 недели после отмены Йодантипирина обнаружены отклонения: у 8 человек - эозинофилия (5-8%); у 3 - моноцитопения (менее 4%); у 1 - относительный моноцитов (11%); у 1 - относительный лимфоцитов; у 1 - ускорение СОЭ до 17 мм/час. Изменение двух показателей найдено только у 3 детей.

Среди детей с отклонениями в картине периферической крови двое во время приема Йодантипирина перенесли грипп в легкой форме, один ребенок – отит, у одного отмечалось обострение респираторного аллергоза. У 6 детей из 10 отклонения от нормы в картине периферической крови сочетались с высоким содержанием интерферона.

Через 3-4 недели после прекращения приема Йодантипирина у детей данной возрастной группы нарушения нормальной картины периферической крови определялись в 8 случаях из 10 (80%). Эозинофилия регистрировалась у 3 детей, моноцитопения - у 6. Изменения двух показателей найдены только у 1 ребенка. Трое детей во время приема Йодантипирина перенесли легкую форму ОРВИ.

У детей 6-9 лет через 2 недели после отмены Йодантипирина отклонения в общем анализе крови регистрировались у 7 из 11 человек (83,6%): у 3 - эозинофилия, у 3 - относительный лимфоцитов, у 1 - ускорение СОЭ, у 1 - снижение содержания гемоглобина. Изменения 2-3 показателей найдены только у 2 детей, причем один из них во время приема препарата перенес грипп, осложнившийся пневмонией. У одного ребенка эозинофилия сопровождалась повышенным содержанием интерферона.

Через 3-4 недели после отмены Йодантипирина у всех наблюдавшихся детей данной возрастной группы (100%) наблюдались те или иные отклонения в картине периферической крови: у 5 – эозинофилия, у 6 – моноцитопения, у 2 – относительный лимфоцитов, у 3 – гемоглобинемия. Изменения 2-3 показателей обнаружены у 5 детей. Только 1 ребенок данной группы перенес грипп во время приема препарата, а у одного эозинофилия сочеталась с увеличением концентрации интерферона в крови.

У 10 из 12 (83,3%) младших детей контрольной группы (не принимавших Йодантипирин) также выявлялись отклонения от нормы в общем анализе крови: у 3 –эозинофилия, у 5 – моноцитопения, у 5 – относительный лимфоцитов, у 2 – относительный нейтрофилез. Изменения двух показателей найдены у 5 детей. Отклонения регистрировались у 7 детей, перенесших один-два раза ОРВИ или грипп, и у 3 детей, не болевших в эпид. сезон. Нейтрофилез отмечен у детей, перенесших ОРВИ и грипп,

У контрольных детей 6-9 лет изменения картины периферической крови наблюдались в 12 случаях ив 16 (75%): у 5 - эозинофилия. у 3 - относительный лимфоцитов, у 6 - моноцитопения, у 6 - снижение уровня гемоглобина. Изменения 2-3 показателей в этой группе выявлены у 8 детей, Отклонения от нормы в перифе­рической крови определялись как у неболевших детей, так и у детей, перенесших грипп и ОРВИ. В эпид. сезон болели 4 ребенка, у одного ребенка с эозинофилией был нейродермит.

Таким образом, изменения в периферической крови выявлялись как у детей, принимавших Йодантипирин, так и в контрольных группах.

У детей 3-5 лет в контрольной группе отклонения регистрировались чаще, чем у детей этого возраста спустя 2 недели после прекращения курса Йодантипирина (в 83,3% случаев и в 47,6% случаев соответственно). Изменения двух показателей также чаще регистрировались в контрольной группе (41,7% против 14,3 % у детей, принимавших Йодантипирин). Степень изменений не имела существенных различий. Через 3-4 недели после отмены Йодантипирина в этой возрастной группе частота отклонений в картине периферической крови была примерно такой же, как в соответствующем контроле (80,0% и 83,3%), однако изменения двух показателей чаще регистрировались у детей, не принимавших Йодантипирин (41,7% против 10%).

У детей старшего возраста (6-9 лет) через 2 недели после отмены Йодантипирина частота регистрации отклонений в картине периферической крови лишь несколько уступала соответствующему показателю в контрольной группе (63,6% и 75% случаев соответственно) . В последнем случае чаще определялись и изменения 2-3 показателей (50% против 18,2% у детей, принимавших Йодантипирин). Через 3-4 недели после прекращения приема Йодантипирина существенных различий в частоте, характере и степени изменений картины периферической крови у детей опытной и контрольной групп не установлено.

При сопоставлении показателей периферической крови у детей разных возрастных групп, принимавших Йодантипирин и перенесших на этом фоне какие-либо заболевания в сравнении с не болевшими в указанный период, существенных различий не обнаружено.

В целом, анализ полученных результатов позволяет говорить о некотором положительном влиянии профилактического приема Йодантипирина на показатели периферической крови, однако для подтверждения этого вывода требуется проведение дополнительных исследований, в том числе и с целью подбора оптимальных доз и схем введения препарата, способствующих поддержанию динамического равновесия форменных элементов крови.

 
ВЛИЯНИЕ ИОДАНТИПИРИНА
НА ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ПЕЧЕНИ

При исследовании активности печеночно-клеточных ферментов АлАТ, АсАТ и ЩФ патологических изменений не найдено ни в основных, ни в контрольной группах. Следовательно, судя по нашим данным, Йодантипирин в испытанных дозах не обладает цитолитическим и холестатическим действием.

ВЛИЯНИЕ ИОДАНТИПИРИНА НА ИММУННЫЙ СТАТУС ДЕТЕЙ

В обследованных группах детей достоверных различий по уровню лейкоцитов и лимфоцитов периферической крови обнаружено не было. Тем не менее, в субпопуляционном составе иммунокомпетентных клеток у детей из равных возрастных групп (3-5 и 6-9 лет) обнаружены значительные особенности. Так, показано (таблицы 1 - 3), что в отдаленные сроки после применения Йодантипирина наблюдается существенно более низкое относительное и абсолютное содержание зрелых CD3+ Т-лимфоцитов у младших детей (42,5±1,16% и 1,09±0,09 Г/л соответственно у детей младшей группы по сравнению с 57,8±4,64% и 1,71±0,21 у старших, Р < 0,05). Необходимо отметить также, что в группе детей младшего возраста во все сроки наблюдения отмечалось снижение уровня зрелых Т-лимфоцитов и по сравнению с соответствующим контролем (таблица 1, 3).

Существенных различий в величине иммунорегуляторного индекса (хелперы/супрессоры) во всех изучаемых группах детей не выявлено (таблицы 1 и 2), поскольку практически везде регистрировались примерно одинаковые значения как относительного, так и абсолютного количества Т-лимфоцитов-хелперов (CD4+), а наблюдаемое в отдаленные сроки после лечения у старших детей повышение по сравнению с контролем абсолютного уровня Т-лимфоцитов-супрессоров (1,02±0,10 Г/л против 0,71±0,05 Г/л, Р < 0,05) не играло определяющей роли в формировании данного показателя.

Наиболее интересные различия субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови у обследованных детей отмечены в уровне естественных киллеров (ЕК - CD 16+). В младшей возрастной группе через 2 недели после окончания приема Йодантипирина относительное содержание этих клеток по сравнению с контролем уменьшается, а в отдаленные сроки - увеличивается до величин, превышающий контрольный уровень (23,0±1,99% в контроле против 17,8±1,54% через 2 недели и 27,1±3,10% через 4 недели после отмены препарата, Р < 0,05). Та же тенденция наблюдается и у детей старшего возраста: снижение относительного количества ЕК в ранние сроки после приема препарата и повышение их уровня в отдаленные сроки (таблицы 1-3).

Достоверные различия между разновозрастными группами наблюдаются по уровню В-лимфоцитов (CD72+): у детей старшей группы как в контроле, так и спустя 2 недели после отмены Йодантипирина в основной группе регистрировалось снижение как относительного, так и абсолютного содержания этой субпопуляции лимфоцитов в периферической крови (таблицы 2 и 3).

Особенности субпопуляционного состава лимфоцитов дополняются особенностями функционирования других иммунокомпетентных клеток, в частности, нейтрофильных фагоцитов. В обеих возрастных группах детей спустя 1,5-2 недели после окончания приема Йодантипирина наблюдается снижение спонтанного фагоцитоза и его достоверное повышение в более отдаленные сроки; при этом интенсивность спонтанной НСТ-реакции имела ту же закономерность: снижение к первой опытной точке и достоверное ее повышение через 3-4 недели. Изменения фагоцитарного резерва (в %) и интенсивности реакции НСТ в обеих возрастных группах имели одинаковые закономерности: достоверное снижение по сравнению с контролем  через   1,5-2   недели  и  достоверное  повышение  в  отдаленные  сроки наблюдения (таблицы 1-3).

Совпадение вектора динамики содержания натуральных киллеров и реакций нейтрофильного фагоцитоза может свидетельствовать в пользу глубокой заинтересованности клеточных механизмов иммунитета при приеме испытуемого препарата. При этом следует отметить, что наблюдаемые в отдаленные сроки после приема препарата повышение содержания ЕК в крови и увеличение фагоцитарного резерва нейтрофилов (что указывает на их высокую способность к завершенному фагоцитозу) можно рассматривать как признаки повышения естественной резистентности организма.

В плане характеристики гуморального звена системы иммунитета (таблицы 1 -4) необходимо отметить повышение уровня IgG и циркулирующих иммунных комплексов у детей старшей возрастной группы в отдаленные сроки после приема препарата. Аналогичное изменение концентрации сывороточного IgG через 3-4 недели после отмены препарата наблюдалось и у детей младшего возраста:, у них также регистрировалось снижение количества IgA через 2 недели после прекращения курса приема Йодантипирина и достоверное его повышение в дальнейшем. В группе старших детей содержание иммуноглобулинов класса IgA практически не менялось. Существенных различий по концентрации IgM и IgE в сравниваемых группах не обнаружено, однако отмечается некоторая тенденция к снижению уровня иммуноглобулина класса IgE в группе 1Б (младшие дети в отдаленные сроки наблюдения). В общем, динамика уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови соответствует таковой для функциональной активности нейтрофилов и процентного содержания естественных киллеров. При изучении содержания сывороточного альфа-интерферона (ИФН) было установлено (таблица 5), что в контрольных группах детей обеих, возрастных групп определяется низкий уровень данного цитокина: 8 и 13 пкг/мл в младшей и старшей группах соответственно, что не выходит за рамки физиологической нормы (0 -50 пкг/мл).

У детей в возрасте 3-5 лет, получавших Йодантипирин, отмечено существенное повышение концентрации интерферона – в среднем до 126,4±42,0 пкг/мл через 2 недели после прекращения приема препарата (группа 1А). Такое высокое среднее значение определяется тем, что у 33% детей было отмечено возрастание уровня ИФН до 200 пкг/мл и выше (у 4 человек - более 500 пк/мл). У остальных детей интерферон в крови практически не определялся. $("a[rel^='prettyPhoto']").prettyPhoto({showTitle:false});